モノクローナル抗体（AF. 2）結合イムノアフィニティーカラム-HPLC法によるトウモロコシおよびピーナッツ中のアフラトキシン類の測定

摘要

抗アフラトキシンB_1（AFB_1）モノクローナル抗体（AF.2）を結合したイムノアフィニティーカラム（IAC）を作製し，トウモロコシおよびピーナッツ中のAF類の測定法を検討した．諸条件を検討した結果，トウモロコシでは，試料10gに2　gのNaClと50mlのメタノール：水（70＋30v/v）を加え，抽出し，ろ液を蒸留水で3倍希釈しゲル1mlに4mgの抗体を結合させたIACでクリーンナップを行い，蛍光HPLCで定量した．添加回収実験の結果，1，3と10ng／gのAF類添加での回収率は，72～88％で，RSDは4％以下ではぼ満足のいくものであった．また，このIACでは，トウモロコシ抽出ろ液希釈液を連続7回までのクリーンナップが可能であった．ピーナッツでは，試料10gに30mlのアセトニトリル：水（60＋40v／v）を加え事由出し，ろ液をPBSで10倍希釈しゲル1mlに16mgの抗体を結合させたIACでクリーンナップを行い，蛍光HPLCで定量した．添加回収実験の結果，1，3と10ng／gのAF類添加での回収率は，87～104％で，RSDとま8％以下ではぼ良好であった．また，このIACでは，ピーナッツ抽出ろ液希釈液を連続5回までのクリーンナップが可能であった．本IAC－HPLC法と多機能カラム法で自然汚染検体を分析した結果，両者の測定値に高い相関性が認められた．