头孢噻呋单克隆抗体的制备及其ELISA、HPLC检测方法的初步研究

摘要

本实验以人工合成的头孢噻呋免疫原免疫BALB/C小鼠，采用杂交瘤技术制备了5株能稳定分泌抗头孢噻呋单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对单抗进行纯化鉴定并初步建立了检测头孢噻呋的竞争ELISA方法。　　本实验对检测头孢噻呋的残留的高效液相色谱法也做了一个初步的探索，建立了一个检测头孢噻呋残留的高效液相色谱法，高效液相色谱法其标准曲线在0.5～10ug/ml之间线性关系良好，曲线方程为C=0.0575+0.0587S，相关系数R=0.9978，检测限为0.5ug/ml；精密度良好，批内平均变异系数为2.48﹪，批间平均变异系数为3.75﹪。

目录

文摘

英文文摘

1文献综述

1.1头孢噻呋的来源及应用

1.2头孢噻呋在动物体内作用特点

1.3头孢噻呋残留危害

1.4动物性组织中头孢噻呋的残留检测的概况

1.4.1微生物检测法

1.4.2理化检测法

1.4.3免疫分析法(IAS)

2引言

3.头孢噻呋人工抗原的合成与鉴定

3.1材料

3.2头孢噻呋人工抗原的合成

3.3头孢噻呋人工抗原的鉴定

3.4结果

4.头孢噻呋单克隆抗体的制备

4.1材料与方法

4.2单克隆抗体的制备方法

4.3单克隆抗体的初步鉴定

4.4结果

5.头孢噻呋ELISA检测方法初步建立

5.1头孢噻呋ELISA检测方法建立的初步研究

5.2.头孢噻呋ELISA检测方法技术参数的确定

5.3结果与分析

5.3.1最佳包被原及上清稀释度的筛选

5.3.2抗原最佳包被时间的选择

5.3.3阻断时间和温度对测定结果的影响

5.3.4封闭剂的选抒

5.3.5二抗的选择

5.3.6 OPD与TMB显色比较

5.3.7竞争反应模式的选择

5.3.8抗体稀释液的选择

5.3.9头孢噻呋ELISA检测方法技术参数的确定

6.头孢噻呋的高效液相检测方法的初步探索

6.1材料与方法

6.1.1药品与试剂

6.1.2仪器

6.1.3试液配制

6.1.4样品预处理方法

6.1.5色谱条件和工作指标

6.1.6 HPLC测定

6.2结果与分析

6.2.1乳样的标准曲线和线性范围

6.2.3回收率得测定

6.2.4乳样中变异系数的测定

7讨论

7.1载体蛋白的选择

7.2头孢噻呋人工抗原的合成

7.3头孢噻呋人工抗原的初步纯化

7.4头孢噻呋人工抗原的鉴定

7.5单克隆抗体的制备

7.5.1免疫方案的制定

7.5.2细胞融合与筛选

7.5.3单克隆抗体的大量制备

7.6 ELISA条件的建立和优化

7.6.1封闭液的选择

7.6.2竞争反应模式的选择分析

7.6.3 ELISA检测方法技术参数的确定

7.7头孢噻呋高效液相检测方法的初步探索

8.结论

参考文献

发表论文情况

致谢