КОНСТРУИРОВАНИЕ ШТАММА ДРОЖЖЕЙ Yarrowia lipolytica, ОБЛАДАЮЩЕГО СПОСОБНОСТЬЮ К ГОМОЛОГИЧНОЙ РЕКОМБИНАЦИИ ГЕНОМА МИТОХОНДРИЙ

摘要

Ни один из исследованных видов эукариот не обладает системой гомологичной рекомбинации ми-тохондриального генома. Предложен метод искусственного создания такой системы в клетках экс-тремофильных дрожжей Yarrowia lipolytica с помощью интегративной генетической конструкции pQ-SRUS, предназначенной для введения в их ядерный геном гена RecA из Bacillus subtilis. Адресация рекомбинантного белка RecA в митохондрии обеспечивается за счет лидерных последовательностей мРНК гена SOD2 (5'-UTR и З'-UTR), обладающих сродством к внешней поверхности митохондрий, и обеспечивающих котрансляционный транспорт RecA внутрь митохондрий. Штамм Y. lipolytica, несущий конструкцию pQ-SRUS, обладает уникальной для живых объектов способностью к интеграции ДНК-конструкций в митохондриальный геном, что было показано с применением тестерной конструкции pQ-NlHN, предназначенной для введения гена EYFP в область инициации трансляции митохондриального гена Y. lipolytica ND1.