Testing of the virucidal activity of disinfectants with bacterio-phages of lactic acid bacteria

摘要

To test the virucidal activity of disinfectants used in the area of food processing, virulent bacteriophages of lactic acid bacteria were chosen as model viruses for the preparation of a European CEN-standard, since these phages are wide-spread in dairies. For this quantitative suspension test, the well-characterized Lactococcus lactis phages P001 (prolate-headed phage type) and P008 (isometric-headed phage type) were used, which have already been deposited in national and international reference culture collections. The suitability of the method was also demonstrated for a virulent (isometric-headed) phage of Streptococcus thermophilus (phage P53), since phages of this bacterial species have recently also been reported to cause significant decreases of lactic acid production in the factories. High-liter stock lysates were obtained, when phage-derived plaques were harvested from agar plates revealing confluent lysis (liter ranging from 1 x 10~(11) - 8 x 10~(11) plaque forming units [PFU] per ml). The stock phage lysates were diluted to obtain virus working suspensions revealing a liter of 1 x 10~9 PFU/ml. To consider interfering proteinaceous subslances, virucidal activily was tesled in the presence of 1% (v/v) acidic whey or - optionally - 1% (v/v) skim milk. After incubation at room temperature (20℃), the test samples were diluled 50-fold in a validated neulralizalion solulion. The phages lested revealed different levels of resistance. The liters of the stock lysates remained stable for several months.%Zur Viruzidieprüfung von Desinfektionsmitteln im Lebensmittelbereich wurden virulente Bakteriophagen von Milchsäurebakterien als Modellviren für die Erarbeitung eines europäischen CEN-Normenentwurf ausgewählt, da diese Phagen in den milchverarbeitenden Betrieben weit verbreitet sind. Für diesen quantitativen Suspensionstest wurden die gut charakterisierten Lactococcus lactis Phagen P001 (prolater Phagentyp) und P008 (isodiametrischer Phagentyp) verwendet, die bereits in nationalen und internationalen Referenz-Stammsammlungen hinterlegt wurden. Die Eignung des Verfahrens wurde auch für einen virulenten Bakteriophagen von Streptococcus thermophilus (Phage P53) gezeigt, da Phagen dieser Bakterienspecies auch in zunehmendem Maße Säuerungsstörungen in den Betrieben verursachen. Von den Phagen ließen sich hochtitrige Ausgangslysate durch Abernten der Plaques von Agarplatten mit konfluenter Lyse erzielen (Titer von 1 x 10~(11) - 8 x 10~(11) Plaque-bildende Einheiten pro ml [PbE/ml]). Die Ausgangslysate wurden für die Versuche auf einen Arbeitstiter von 1 x 10~9 PbE/ml eingestellt. Zur Berücksichtigung eines Eiweißfaktors wurde die viruzide Wirkung in Gegenwart einer Proteinbelastung von 1% Sauermolke oder - optional - 1% Magermilch geprüft. Nach Inkubation bei Raumtemperatur (20℃) wurden die Versuchsansätze zur Inaktivierung des Desinfektionsmittels in einer validierten Neutralisationslösung 1:50 verdünnt. Die Phagen zeigten ein unterschiedliches Resistenzverhalten. Die Titer der Ausgangslysate blieben über mehrere Monate stabil.