Detection of Aflatoxin B1 in Corn, Rice, and Barley by ELISA, Using a Heavy-Chain IgG_(2b) Isotype Monoclonal Antibody

摘要

Una rápido y sensible, indirecto competitivo ensayo de inmunoabsorción enzimática (IC-ELISA) ha sido desarrollado para medir la aflatoxina B1 (AFB1) en maíz, arroz, y cebada utilizando la cadena pesada IgG_(2b), isoti-po de anticuerpos monoclonales (AcM). Una AcM fue aislado y caracterizado después de la fusión de células de mieloma de células de bazo aislado de ratones BALB/c que habían sido inmunizados con la oxima carboximetil AFB1 conjugado con albúmina sérica bovina. El anticuerpo fue IgG_(2b) con una X cadena ligera. La reactividad cruzada del Anti-AFB 1 clon de AcM fueron de 1.0% frente a la aflatoxina M1 y <1.0% frente a la aflatoxina B2, la aflatoxina Gl, y deoxinivalenol. El límite de detección para AFB1 fue 0.001 ng/mL, y la concentración de AFB1 necesarios para un 50% de inhibición de la unión fue de 0.01 ng/mL. El rango lineal para desarrollados IC-ELISA competitivo indirecto fue 0.001-10.0 ng/mL de aflatoxina Bl. Los ensayos de las muestras de extracto de cereales mezclados con AFB 1 que van en la concentración de 0.1 a 10 ng/mL como resultado una recuperación de ELISA media de 93.7%. En total, 53 muestras de maíz, arroz y cebada se obtuvieron de las granjas en el noreste de China. La concentración de AFB1 en todas las muestras recogidas fue de <1 ng/g. El promedio de los índices de contaminación de AFB 1 fueron de 66% en maíz, 42% en el arroz, y el 58% en la cebada. Los resultados indican que las precauciones necesarias que deben tomarse para minimizar la contaminación de AFB 1 en el maíz, el arroz, y la cebada.%A rapid and sensitive, indirect competitive enzyme-linked immunosor-bent assay (IC-ELISA) method has been developed to measure aflatoxin B1 (AFB1) in corn, rice, and barley using a heavy-chain IgG_(2b) isotype monoclonal antibody (Mab). One Mab was isolated and characterized after fusion of myeloma cells with spleen cells isolated from BALB/c mice that had been immunized with AFB 1 carboxymethyl oxime conjugated with bovine serum albumin. The antibody was lgG_(2b) with a λ light chain. The cross-reactivities of the anti-AFB1 Mab clone were 1.0% against aflatoxin M1 and <1.0% against aflatoxin B2, aflatoxin G1, and deoxynivalenol. The limit of detection for AFB1 was 0.001 ng/mL, and the AFB1 concentration required for 50% inhibition of binding was 0.01 ng/mL. The linear range for the developed IC-ELISA was 0.001-10.0 ng of AFB 1 per mL. Assays of cereal extract samples mixed with AFB1 ranging in concentration from 0.1 to 10 ng/mL resulted in a mean ELISA recovery of 93.7%. In total, 53 samples of corn, rice, and barley were collected from farms in northeastern China. The concentration of AFB 1 in all samples collected was <1 ng/g. The average AFB1 contamination rates were 66% in com, 42% in rice, and 58% in barley. The results indicate that necessary precautions will have to be taken to minimize AFB 1 contamination in corn, rice, and barley.