Inulin Fructotransferase (DFA I-producing) from Arthrobacter sp. H10-2

摘要

青森県弘前市の土壌から分離した細菌H10-2株は培養上淸中にイヌリンからオリゴ糖DFAIを生産する酵素を生産した.本菌株について分類学的な検討を行った結果，本菌株はArthrobacter 属の細菌と同定された.DFAIオリゴ糖合成酵素を精製し，その性質を解析した.本酵素は粗酵素液からイオン交換クロマト，疎水クロマトによって電気泳動的に単一バンドに精製された.精製の過程で比活性は約35.6倍に上昇、し，17.3%の収率で精製酵素が得られた.本酵素の至適pHは5.5,至適温度は40℃であった.30分間の熱処理を行った場合の酵素の耐熱温度について解析した結果，本酵素は75℃まで安定的に活性を有していた.SDS-PAGEの結果分子量は約45 kDaであった.ゲル濾過の結果からは分子量は約46 kDaであった.これらの結果から本酵素は単量体と推察された.イヌリンに作用させた時の反応生成物を分析した結果，主産物としてDFA I,切れのこりの副産物としてフラクトオリゴ糖(GF_3, GF_4)が生成していることが示された.%This manuscript reports the purification and characterization of an inulin fructotransferase (DFA I-producing) [EC 4.2.2.17] from Arthrobacter sp. H10-2. The enzyme was parified 35.6-fold from the culture supernatant of the microorganism with a 17.3 % yield. The enzyme exhibited maximal activity at pH 5.5 and 40℃；however, activity began to decrease after it was exposed to extrenw conditions (i.e., 75 ℃ for 30 min). Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and gel filtration chromatography were used to estimate the molecular mass of the enzyme, which was determined as 45 kDa and 46 kDa, respectively. Therefore, it was predicted to be a monomer. Furthermore, we observed the production of the minor products of the enzyme reaction, GF_3 (nystose) and GF_4 (fructofuranosyl nystose).