Uso da técnica de Southern Blot/Hibridiza??o associada à rea??o em cadeia da polimerase para aumentar a sensibilidade no diagnóstico das infec??es por hemoplasmas em gatos domésticos: Use of Southern Blot/Hybridization technique associated to polymerase chain reaction to improve the sensitivity in the diagnosis of hemoplasma infections in domestic cats

摘要

O objetivo deste trabalho foi verificar se a técnica de Southern Blot/Hibridiza??o (SB) em associa??o à rea??o de polimeriza??o em cadeia (PCR) aumenta a sensibilidade na detec??o de DNA de hemoplasmas em gatos domésticos (Felis catus). O sangue total foi coletado em tubos contendo o anticoagulante ácido etilenodiamino tetra-acético, o DNA extraído a partir de 149 animais e a PCR realizada com o uso de sequências iniciadoras espécie-específicas, para amplificar subunidade 16S do RNA ribossomal de Mycoplasma haemofelis e 'Candidatus M. haemominutum' dessas amostras. Para a hibridiza??o, foram utilizadas sondas específicas quimicamente marcadas, e os resultados visualizados por meio da adi??o de substrato quimiluminescente seguida de autoradiografia. Dezoito (12,1%) das 149 amostras testadas apresentaram resultado PCR-positivo para o DNA de hemoplasmas. A técnica de SB mostrou que 24/149 (16,1%) amostras apresentaram resultado positivo para hemoplasmas, confirmando os 18 resultados PCR-positivos, além de revelar seis outros adicionais (p < 0,001). O método de SB com sondas específicas mostrou-se mais sensível do que a PCR realizada isoladamente, sendo complementar para o diagnóstico das infec??es causadas pelos hemoplasmas felinos.