Plasma phospholipid transfer protein fused with green fluorescent protein is secreted by HepG2 cells and displays phosphatidylcholine transfer activity

摘要

Phospholipid transfer protein (PLTP) is a serum glycoprotein with a central role in high-density lipoprotein metabolism. We created a fusion protein in which enhanced green fluorescent protein (EGFP) was fused to the carboxyl-terminus of PLTP. Stably transfected HepG2 cells, which overexpress this fusion protein, were generated. PLTP-EGFP was translocated into the ER and fluoresced within the biosynthetic pathway, showing a marked concentration in the Golgi complex. The transfected cells secreted into the growth medium phospholipid transfer activity 7-fold higher than that of the mock-transfected controls. The medium of the PLTP-EGFP - expressing cells displayed EGFP fluorescence, demonstrating that both the PLTP and the EGFP moieties had attained a biologically active conformation. However, the specific activity of PLTP-EGFP in the medium was markedly reduced as compared with that of endogenous PLTP. This suggests that the EGFP attached to the carboxyl-terminal tail of PLTP interferes with the interaction of PLTP with its substrates or with the lipid transfer process itself. Fluorescently tagged PLTP is a useful tool for elucidating the intracellular functions of PLTP and the interaction of exogenously added PLTP with cells, and will provide a means of monitoring the distribution of exogenously added PLTP between serum lipoprotein subspecies.Key words: GFP, fusion protein, Golgi apparatus, phospholipid transfer activity, protein secretion.La protéine PLTP impliquée dans le transfert des phospholipides est une glycoprotéine sérique qui joue un rôle central dans le métabolisme des lipoprotéines de haute densité. Nous avons créé une protéine de fusion dans laquelle la protéine fluorescente EGFP a été fusionnée à l'extrémité carboxy-terminale de PLTP. Des cellules HepG2 surexprimant la protéine de fusion après transfection stable ont été générées. La PLTP-EGFP est transloquée dans le réticulum endoplasmique et émet sa fluorescence tout au long du sentier de biosynthèse, une concentration marquée de fluorescence étant observée dans le complexe de Golgi. Les cellules transfectées sécrètent dans leur milieu de culture une activité de transfert de phospholipides 7 fois plus élevée que les cellules transfectées contrôle. Le milieu de culture des cellules exprimant la PLTP-EGFP est fluorescent, démontrant que les composantes EGFP et PLTP sont dans une conformation biologiquement active. Cependant, l'activité spécifique PLTP-EGFP du milieu est fortement réduite, comparativement à celle de la PLTP endogène. Ceci suggère que la EGFP attachée à l'extrémité carboxy-terminale de la PLTP interfère lors de l'interaction de la PLTP avec son substrat ou lors du processus de transfert des lipides. La PLTP conjuguée à une composante fluorescente est un outil utile pour élucider les fonctions intracellulaires de PLTP, l'interaction de PLTP exogène avec les cellules et fournira un moyen qui permettra de suivre la distribution de PLTP exogène entre les différentes classes de lipoprotéines.Mots clés : GFP, protéine de fusion, appareil de Golgi, activité de transfert de phospholipides, sécrétion de protéines.[Traduit par la Rédaction]