人脂肪肝脱细胞支架的制备及肝癌细胞的体外三维培养

摘要

目的体外建立一个基于人脂肪肝脱细胞支架的肝癌三维模型。方法通过反复冻融、梯度浓度的SDS和1% Triton X-100经门静脉和肝动脉双重灌注及组织块在Triton X-100中反复震荡的方法制备人脂肪肝脱细胞基质（hFLM）。在hFLM内培养HepG2细胞，检测其存活、形态、增殖及黏附分子表达情况。结果采用双重灌注的方式显著缩短了支架制备的时间，同时保留了肝脏的细胞外基质成分及三维结构。HepG2细胞在hFLM内培养15 d，存活良好，并呈现与体内相似的肿瘤增殖模式。而且，hFLM培养的HepG2细胞和皮下成瘤组均低表达E-cadherin，高表达Vimentin，与二维培养组正好相反。基于hFLM的肝癌模型缺少有效的血管网络，缺乏足够的营养转运，可能导致后期细胞增殖减缓。hFLM培养的HepG2细胞第12天时PCNA指数较第6天时降低了29.3%。结论建立一种新的人脂肪肝脱细胞方案，并验证了基于hFLM体外构建肝癌模型的可行性。