长爪沙鼠NAFLD模型中CIP4基因的表达及与β-catenin蛋白相互作用的免疫共沉淀验证

摘要

目的 获得长爪沙鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型中CDC42作用蛋白4(CIP4)基因的表达规律及是否受β连环蛋白(β-catenin)调控的证据.方法 3月龄雄性长爪沙鼠30只采用随机数字表法分为正常组6只和模型组24只,模型组按饲喂高脂饲料的时间不同分为2周组、4周组、8周组、12周组,每组6只.按组采集肝脏大叶标本4份,HE染色及Masson染色检测肝脏的病理变化,荧光定量PCR(qPCR)法检测CIP4 mRNA相对表达量,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测CIP4蛋白相对表达量,免疫共沉淀(CoIP)验证CIP4与β-catenin的相互作用.结果 肝病理学检测结果 显示,随着造模时间的延长,模型组沙鼠均出现肝脏脂肪病变(单纯脂肪肝,2～4周造模,S0～S1),脂肪性肝炎(4～8周造模,脂堆积形成肝细胞的肿胀,坏死和空泡,少量纤维化出现,S1～S2),肝纤维化(8～12周造模,S2～S3),部分有假小叶形成.qPCR和Western blot结果 显示,随着造模时间延长,CIP4 mRNA和蛋白相对表达量均下降.模型组被CoIP下来的CIP4蛋白明显下降,这表明模型组β-catenin与CIP4的相互作用减少.结论 随着NAFLD病程的进展,长爪沙鼠模型CIP4呈现降低趋势,其作用受β-catenin的调控.