灵芝三萜酸经Pnpla3基因的降脂效果体外试验——基于长爪沙鼠肝原代细胞的脂变模型

摘要

目的 建立长爪沙鼠Pnpla3基因敲减的肝原代细胞的脂变模型,并用于评价灵芝三萜酸的降脂效果.方法 分离培养长爪沙鼠肝原代实质细胞,以棕榈酸(PA)诱导成肝脂变模型,根据Pnpla3三个外显子序列设计、合成三对Pnpla3基因的干扰RNA载体,并通过qPCR及Western blot法检测Pnpla3的表达量及干扰效率筛选出一对稳转肝实质的干扰载体.以高(1μmol/L)、中(0.1μmol/L)、低(0.01μmol/L)三个剂量的灵芝三萜酸培养细胞,并以阳性药物蛋氨酸(7μmol/L)为对照,检测干扰Pnpla3基因后的细胞甘油三酯(TG)的含量以进行降脂效果观察.结果 诱导24 h内,长爪沙鼠肝脂变细胞脂滴增加的较多且大多数细胞形状正常的PA 400μmol/L为造模的合适浓度,以Pnpla3的第二外显子为靶点设计的siRNA2组敲低效果最好,干扰效率高于70％.干扰Pnpla3基因可以起到降低细胞内TG的作用,单独加入中高剂量的灵芝三萜酸有明显的降脂效果(P<0.01),干扰Pnpla3基因与加入灵芝三萜酸的降脂效应具有累积作用(P<0.01).结论 建立了长爪沙鼠肝实质原代细胞的脂变模型,灵芝三萜酸对干扰Pnpla3基因后的长爪沙鼠肝实质细胞中TG的含量有明显的抑制或减轻作用,灵芝三萜酸降脂效应与磷脂代谢相关2个通路(ko00561,ko00564)中Pnpla3基因的表达相关.