扶正化瘀胶囊对气虚血瘀型肝纤维化模型大鼠细胞自噬基因LC3Ⅱ和p62的干预作用

摘要

目的 探讨扶正化瘀胶囊对气虚血瘀肝纤维化模型大鼠细胞自噬基因LC3II和p62 mRNA、蛋白表达水平的干预作用.方法 40只SD大鼠根据随机数字表法分正常组、肝纤维化组、气虚血瘀肝纤维化组和扶正化瘀治疗组,每组10只.肝纤维化组、气虚血瘀肝纤维化组、扶正化瘀治疗组大鼠采用四氯化碳(CCl4)与橄榄油按4:6比例配40％油剂,按0.3mL/100g剂量,皮下注射制备模型,气虚血瘀型肝纤维化组大鼠在肝纤维化模型制备的基础上加用游泳疲劳试验制备气虚血瘀型肝纤维化模型.正常组、肝纤维化组、肝纤维化气虚血瘀组大鼠给予生理盐水2mL灌胃,1天1次,连续4周.扶正化瘀治疗组大鼠给予扶正化瘀胶囊混悬液,按0.5g/kg体质量灌胃,1天1次,连续4周.实验结束后处死大鼠摘取肝脏,测定肝重、肝湿重,天狼星红染色后评价肝脏纤维化程度,采用qPCR、Western blot测定肝组织LC3II、p62 mRNA和蛋白表达水平.结果 扶正化瘀治疗组大鼠体质量(375.80±24.36)g、肝湿重(11.31±1.13)g,高于气虚血瘀肝纤维化组(356.10±20.45)g、(10.34±1.13)g,P﹤0.05;天狼星红染色显示,气虚血瘀肝纤维化组大鼠肝纤维化程度最重,扶正化瘀治疗后显著改善;气虚血瘀肝纤维化组Ishak评分(5.80±0.80)分最高,扶正化瘀治疗组(2.70±0.90)分显著下降(P﹤0.05).气虚血瘀肝纤维化组LC3ⅡmRNA(1.44±0.01)及蛋白(3.01±0.57)表达最高,扶正化瘀治疗组LC3ⅡmRNA(1.20±0.01)、蛋白(2.04±0.30)均显著下降(P﹤0.05);气虚血瘀肝纤维化组p62 mRNA(0.95±0.05)、蛋白(0.19±0.12)表达最低,扶正化瘀治疗组p62 mRNA(1.12±0.01)、蛋白(0.67±0.32)显著升高(P﹤0.05).结论 气虚血瘀型肝纤维化模型大鼠较单纯肝纤维化模型大鼠LC3Ⅱ表达量明显增加,自噬底物p62消耗明显,扶正化瘀胶囊可以显著抑制LC3Ⅱ/p62表达.