LC3-Ⅱ

摘要： 目的分析微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3Ⅱ)、SET结构域分叉蛋白(SETDB1)对进展期结直肠癌患者预后的预测价值及其影响因素。方法回顾性选择2019年1月1日至2020年1月1日琼海市人民医院肿瘤科诊治的进展期结直肠癌患者73例。问卷调查患者年龄(0.05),肿瘤直径≥5 cm、Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移、远处转移、侵及全层及浸润至深肌层与LC3Ⅱ、SETDB1阳性表达有关(P05);LC3Ⅱ阳性表达患者生存时间少于阴性患者,SETDB1阳性表达患者生存时间少于阴性患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论LC3Ⅱ、SETDB1高表达影响结直肠癌患者肿瘤直径、TNM分期、浸润深度临床特征,LC3Ⅱ、SETDB1表达影响预后生存时间。

摘要： 目的:探讨驻景丸加减方对形觉剥夺性近视小鼠视网膜自噬的影响。方法:C57BL/6小鼠30只随机分为阴性对照组、近视模型组以及中药干预组,每组10只。除了阴性对照组外,近视模型组、中药干预组小鼠均使用半透明EP管遮盖右眼制成形觉剥夺性近视(FDM)模型;中药干预组灌胃驻景丸加减方混悬液0.546g/(kg·d)(0.15mL/d),阴性对照组、近视模型组灌胃等量生理盐水(0.15mL/d),共4wk。分别于实验开始、实验结束,使用带状检影镜测量小鼠右眼屈光度,A超测量小鼠右眼眼轴长度。实验结束时,取所有小鼠右眼进行检测,免疫荧光法定位和检测视网膜小胶质细胞标志物(Iba1)活性与迁移;透射电镜观察视网膜色素上皮细胞中自噬小体形成情况;Western Blot、实时荧光定量PCR(q-PCR)检测视网膜组织自噬标志物LC3Ⅱ和p62蛋白定量及基因表达情况。结果:实验结束时小鼠右眼屈光度示,近视模型组、中药干预组形成相对近视,近视模型组、中药干预组较阴性对照组显著降低(均P<0.01)。实验结束时,近视模型组、中药干预组眼轴长度较阴性对照组眼轴长度显著增加(P<0.01)。免疫荧光法定位和检测Iba1示,近视模型组视网膜中Iba1的平均光密度增加趋势最明显,阴性对照组增高趋势次之,中药干预组有降低趋势,近视模型组较阴性对照组显著增加(P<0.05),中药干预组较近视模型组显著降低(P<0.05),且发现近视模型组、中药干预组Iba1向神经节细胞层迁移。透射电镜示,近视模型组、中药干预组视网膜色素上皮细胞中观察到自噬小体。Western Blot法、q-PCR检测结果示,LC3Ⅱ、p62表达在中药干预组增加趋势最明显、近视模型组其次、阴性对照组最低。结论:驻景丸加减方可能通过抑制小胶质细胞活化,增强FDM小鼠视网膜自噬。

摘要： 目的观察电针预处理心俞穴和神门穴对大鼠离体心肌缺血再灌注心肌组织自噬的调控作用。方法将36只SD大鼠随机分为正常组、缺血再灌注组和电针预处理组,每组12只。电针预处理组在造模前3周给予电针心俞穴和神门穴干预,20 min/次,1次/d,6 d/周,连续干预3周后利用离体灌流装置制备大鼠离体心肌缺血再灌注模型(平衡灌注20 min,缺血40 min,再灌注2 h);缺血再灌注组不给予术前干预,模型制备方法同电针预处理组;正常组无缺血再灌注操作,平衡灌注180 min。停灌注前20 min取冠状动脉流出液,检测心肌酸激酶(CK)、心肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)含量;灌流结束后,苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织病理形态,透射电镜观察大鼠心肌组织超微结构,Western blot法检测大鼠心肌组织中自噬标志蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ表达情况。结果缺血再灌注组冠状动脉流出液中CK、CK-MB、LDH含量均显著高于正常组(P均<0.05),电针预处理组均显著低于缺血再灌注组(P均<0.05)。HE染色显示缺血再灌注组心肌纤维溶解、断裂,甚至坏死,细胞肿胀;电针预处理组心肌纤维间隙轻度增宽,坏死灶少,细胞肿胀程度较轻。透射电镜显示缺血再灌注组心肌细胞线粒体嵴排列不规则、断裂,自噬溶酶体数量显著增加;电针预处理组心肌细胞核及线粒体结构基本完整,自噬溶酶体数量较缺血再灌注组少。缺血再灌注组心肌组织中Beclin-1和LC3-Ⅱ表达量均显著高于正常组(P均<0.05),电针预处理组均显著低于缺血再灌注组(P均<0.05)。结论电针预处理可通过下调自噬标志蛋白的表达,从而发挥保护心肌、减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用。

摘要： 目的 观察电针对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的改善程度及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1表达的影响.方法 根据随机数字表法,将72只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和电针组,每组24只.采用Longa线栓法建立改良的急性局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,并在缺血1h后进行再灌注.参照改良的Zea Longa 8级神经功能缺损评分法对3组大鼠脑神经功能损伤程度进行评估.电针组于造模成功后5min和16h进行电针干预.于再灌注后24h取材.TTC染色法观察各组大鼠脑梗死体积;HE染色法观察大鼠脑组织病理学变化;Western blot检测大鼠右侧纹状体脑组织中LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达,qPCR检测Beclin1 mRNA表达.结果 对照组无行为学改变,模型组神经功能缺损评分显著高于对照组(P<0.05);与模型组比较,电针组神经功能缺损评分明显低于模型组(P<0.05).电针组脑梗死体积较模型组明显减少(P<0.05).与模型组比较,电针组LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达明显增加(P<0.05),Beclin1 mRNA的表达亦明显增加(P<0.05).结论 电针治疗可能通过促进自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1的表达,调控自噬的发生,减小大鼠脑梗死体积,改善神经功能缺损,实现对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护效应.

摘要： 目的 探索利美尼定(RIL)对肌萎缩侧索硬化(ALS)相关蛋白质TAR DNA结合蛋白43(TDP-43)降解的影响.方法 用瞬时转染的方法在运动神经元样细胞系NSC-34中过表达WT TDP-43,与家族型ALS相关的Q331K TDP-43、M337V TDP-43突变蛋白、TDP-43的两种C末端片段TDP-25和TDP-35,再给予利美尼定干预16h,通过蛋白印迹方法检测5种TDP-43的表达水平.结果 在自噬诱导剂RIL的作用下,两种突变TDP-43及其C末端片段的表达明显减少,而WT TDP-43的蛋白质表达水平无明显变化.在自噬阻断剂3-MA的干预下,RIL降解异常蛋白质的作用也被阻断.结论 RIL可经由自噬通路降解Q331K TDP-43、M337V TDP-43及其C末端截短片段.

摘要： 目的 BEX2介导细胞自噬通路与小鼠结肠癌的分级、疗效及预后的相关性.方法 选取60只SD小鼠进行二甲肼颈背部皮下注射,注射频率1次/周,连续5周,建立结肠癌小鼠模型,并给予奥沙利铂15 mg/kg,腹腔注射,每周2次,连续给药8周.免疫组织化学法检测小鼠结肠癌组织BEX2、LC3-Ⅱ蛋白表达;Western blot法和Real-Time PCR检测结肠癌组织BEX2、LC3-Ⅱ蛋白含量和mRNA含量的表达;并分析BEX2、LC3-Ⅱ表达与小鼠结肠癌病理分期及复发转移的相关性.结果 小鼠治疗后的结肠癌组织中的平均BEX2光密度、BEX2蛋白和mRNA表达量较治疗前均明显下降;而平均LC3-Ⅱ光密度、LC3-Ⅱ蛋白和mRNA表达量较治疗前均明显升高(P<0.05).LC3-Ⅱ以及BEX2的阳性表达与结肠癌的浸润深度、淋巴结转移、分化程度、Dukes分期、是否远处转移以及TNM分期呈现显著相关性(P<0.05).结论 小鼠结肠癌组织中BEX2、LC3-Ⅱ异常表达与肿瘤转移密切相关,可作为预测结肠癌分级、疗效及预后的分子生物学靶点.

摘要： 目的探讨Apelin-13对大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)时自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1的影响。方法取健康清洁SD大鼠54只,随机分为对照组、造模组、给药组,每组18只。每组大鼠分别对应处理后第3、6、12 h检测血清淀粉酶,并取部分胰腺组织做常规病理切片、HE染色观察其病理变化,Western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1的表达情况。结果造模组各时间点血清淀粉酶、LC3-Ⅱ、Beclin-1表达水平较对照组显著提高,给药组各时间点血清淀粉酶、LC3-Ⅱ、Beclin-1表达较造模组显著降低(P均<0.05),ANP时自噬相关蛋白表达会随着病理损伤程度加重而增加,且Apelin-13可以显著抑制自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达。结论Apelin-13在ANP中通过下调自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达发挥对胰腺组织的保护作用。

摘要： 目的 探讨MIR-137对细胞自噬的调控作用及机制.方法 选择U87细胞株作为实验材料,通过细胞培养、MIR-137慢病毒与拮抗剂转染、D-hank's液饥饿诱导细胞自噬、细胞蛋白提取、western blot检测、RT-PCR检测等实验步骤,检测U87细胞中的MIR表达水平、各组细胞中的GFP-LC3Ⅱ阳性细胞率、自噬标记蛋白LC3Ⅱ与SQSTM1表达量、ATG7基因及蛋白表达量、重组ATG7质粒与MIR-137慢病毒和拮抗剂分别共转染后的U87细胞中的ATG7表达水平及饥饿诱导下的各组细胞中的LC3Ⅱ与SQSTM1表达量.结果 MIR-137慢病毒与拮抗剂转染使MIR-137表达量分别有显著的上调与下调(P0.01);MIR分别转染慢病毒与拮抗剂后,LC3Ⅱ蛋白表达量分别有明显的下调与上调现象(P<0.01),SQSTM1蛋白表达量则有显著的上调与下调现象(P<0.01);MIR分别转染慢病毒与拮抗剂后,ATG7基因表达量分别有显著的下调与上调现象(P<0.01);重组ATG7质粒与MIR-137慢病毒共转染显著上调了U87细胞中的ATG7表达水平(P<0.01),ATG7的再表达显著降低了MIR-137在细胞自噬活动中的调控作用(P<0.01).结论 MIR-137对于细胞自噬有重要的调控作用,ATG7是其作用靶点之一,通过调控U87细胞中的ATG7基因及蛋白表达抑制饥饿诱导下的细胞自噬活动.

摘要： 目的 探讨Apelin-13对大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)时自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1的影响.方法 取健康清洁SD大鼠54只,随机分为对照组、造模组、给药组,每组18只.每组大鼠分别对应处理后第3、6、12 h检测血清淀粉酶,并取部分胰腺组织做常规病理切片、HE染色观察其病理变化,Western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1的表达情况.结果 造模组各时间点血清淀粉酶、LC3-Ⅱ、Beclin-1表达水平较对照组显著提高,给药组各时间点血清淀粉酶、LC3-Ⅱ、Beclin-1表达较造模组显著降低(P均<0.05),ANP时自噬相关蛋白表达会随着病理损伤程度加重而增加,且Apelin-13可以显著抑制自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达.结论 Apelin-13在ANP中通过下调自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达发挥对胰腺组织的保护作用.

摘要： 目的 探讨自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和p62在不明原因复发性流产(URSA)患者绒毛组织中的表达和临床意义.方法 选取2020年3-7月在该院妇产科行清宫术的URSA患者及行人工流产术的正常妊娠者分别作为URSA组和对照组,每组10例.采用HE染色观察两组绒毛组织形态学差异,采用Western blot检测两组绒毛组织中LC3-Ⅱ、p62蛋白的表达水平,并通过免疫组化实验观察两组患者绒毛组织中LC3-Ⅱ、p62的定位和表达情况.结果 HE染色结果显示,URSA组绒毛组织内部细胞出现皱缩,颜色暗红,细胞之间出现断离,绒毛组织有破损.Western blot检测结果显示,与对照组比较,URSA组中LC3-Ⅱ蛋白表达量上调、p62的表达量下调,差异均有统计学意义(P<0.01).免疫组化试验结果显示,LC3、p62蛋白主要定位于细胞质,表达情况与Western blot检测结果一致.结论 URSA患者绒毛组织中LC3-Ⅱ蛋白表达上调,p62蛋白表达下调,提示细胞自噬可能参与URSA的发生.

摘要： 本发明属于应用化学领域，具体涉及一种高通量准确建立生物样本中甘油三酯LC‑MS/MS数据库的方法。所述方法包括：1)理论推导生物样本中甘油三酯化合物的分子量；2)根据甘油三酯化合物在较低能量下的质谱裂解规律，以及酯质化合物在反相色谱上表现出的规律，推测出生物样本中各甘油三酯化合物相应的的保留时间；3)进一步通过甘油三酯化合物在较高能量下的质谱裂解规律，验证保留时间；最终建立甘油三酯化合物的LC‑MS/MS数据库。本发明所述方法快速简单，且耗费少、适用性强，既可以用于不同生物样本中甘油三酯化合物的分析，也可以用于其他类型酯质或酯质类似物的高通量分析。

摘要： 本发明提供一种以APCI为离子源利用LC/MS的方法对五环三萜类物质进行检测方法，所述的方法可以不用进行衍生化，可以在6分钟内检测三种同分异构体，灵敏度高。

摘要： 本发明公开了一种基于LC‑MS/MS技术测定醋纤滤棒中三乙酸甘油酯含量的方法，该方法首先进行样品提取，提取液经固相萃取SPE小柱或分子印迹‑固相萃取小柱净化除杂，洗脱收集洗脱液，用甲醇定容，有机滤膜过滤，待检测；最后使用LC‑MS/MS进行分析，正离子电离模式，多重反应监测扫描，本发明方法能够准确可靠的测定醋纤滤棒中三乙酸甘油酯含量，具有操作简单、定性准确、灵敏度高，抗干扰能力强。

摘要： 一种检测人血浆骨化三醇的浓度的LC‑MS‑MS方法，包括以下步骤：在96孔板中加入样品，使用离心机瞬时离心，将所有的样品加入0.01％FA的水溶液，通过离心处理，取上清液至已活化好的SPE板上，收集的废液弃除，加1mL water至SPE板，加ACN的水溶液至SPE板，使用96孔板作为收集板，加CHCl3，收集板吹干，将收集板的所有样品，加入PTAD溶液，将收集板置于摇扳机上，吹干，将收集板的所有样品，混匀后的样品放置在自动进样器中，进行采样，使用SPE进行血浆样品的分离纯化，提取骨化三醇，使用PTAD对SPE提取后样品进行衍生化反应，提高约10倍信号，通过在流动相中添加微量的乙胺，提高仪器响应信号。

摘要： 本发明公开了一种基于LC‑MS/MS技术的定量分析环境灰尘样品中TUVs（三嗪类紫外吸收剂）的方法，包括样品前处理、LC‑MS/MS检测。本发明采用乙腈对环境灰尘样品进行超声辅助萃取，采用LC‑MS/MS在多反应监测（multiple reaction monitoring，MRM）模式下使用电喷雾离子源（Electron Spray Ionization,ESI）进行分析。采用保留时间和质谱谱图库定性鉴定采集的环境灰尘中的7种三嗪类紫外吸收剂样品，并根据色谱情况，使用外标法定量分析。本发明提供的方法精度高且稳定，对三嗪类紫外吸收剂类物质后续研究有重要意义。

摘要： 一种基于FFT的LC三参数快速测量电路，该电路系统包括：LC双谐振电路与读出电路两部分，其中LC双谐振电路与读出电路通过电感耦合进行能量耦合和信号传输；信号处理模块对读出电路中的电压信号进行采集与处理，得出LC双谐振电路的两个谐振频率和品质因数Q值，由此可以分别得到所测量的三个参数值。所述信号处理模块中ADC能将包含了LC双谐振电路信息的模拟电压振荡信号转化为数字信号，FPGA则负责控制测量的速度、开关的切换、数字信号处理以及谐振频率和Q值的计算。本发明体积小便携性好，相较于扫频测量方法具有快速测量的优点。

摘要： 本发明提供一种以APCI为离子源利用LC/MS的方法对五环三萜类物质进行检测方法，所述的方法可以不用进行衍生化，可以在6分钟内检测三种同分异构体，灵敏度高。

摘要： 本发明公开了一种基于LC‑Q‑TOF‑MS表征甘油三酯进行大豆和大豆油的产地溯源方法，采用液相色谱‑四级杆飞行时间质谱仪对大豆进行IDA‑MS高分辨质谱数据的采集，将大豆油样品中国的甘油三酯化合物MarkerView Peaks数据进行主成分分析、偏最小二乘法‑判别分析和正交偏最小二乘法回归分析等多元统计分析方法处理，获得不同产地大豆油脂特征分布规律，构建多元统计分析判别预测模型，并结合多国以及两国大豆和大豆油产地溯源鉴定模型进一步完善大豆和大豆油产地溯源鉴定的准确性，本发明还能够通过单独建立两国大豆和大豆油产地溯源鉴定模型来提高鉴定特定两个国家的大豆产地溯源准确度。

摘要： 本发明公开了一种LC‑MS/MS技术测定干血斑中氧化三甲胺的方法，其技术方案是：包括S1、采集样本；S2、样本处理；S3、LC‑MS/MS测定；一种LC‑MS/MS技术测定干血斑中氧化三甲胺的方法有益效果是：无需衍生，简单快速，在缩短前处理时间的同时也避免了衍生化过程中高温对氧化三甲胺的影响，使检测更为准确；乙腈具有良好的除蛋白作用且氧化三甲胺溶于乙腈，LC‑MS/MS技术检测干血斑氧化三甲胺是一种快速、准确且灵敏的方法，可应用于临床检测和科研研究，尤其适用于大样本的人群研究，样本保存时应注意保存温度、时间对干血斑中氧化三甲胺浓度的影响，LC‑MS/MS技术测定样本预处理过程更加简单、耗时短同时成本下降，避免大样本测定时受限制的问题。

摘要： 本实用新型公开了一种三相LC串联限流电路，包括三相交流电源；三相二极管整流桥，第一输入端和第二输入端分别通过第一限压电容和第二限压电容与三相交流电源连接；储能电容，正负极分别与三相二极管整流桥连接；第一继电器，第一端和第二端分别与第一限压电容的第一端和第二端连接，第三端与第一直流电源连接，第四端通过信号控制端与第一直流电源连接；第二继电器，第一端和第二端分别与第二限压电容的第一端和第二端连接，第三端与第二直流电源连接，第四端通过信号控制端与第二直流电源连接。此实用新型解决了传统软充电技术二次电流冲击和滤波差的问题，通过二极管整流桥和储能电容，消除了二次电流冲击，提升了节能效果，易于推广使用。