羊粪沼液微生物总DNA提取方法优化比较研究

摘要

[目的]目前沼液污泥中99％的微生物不可培养的,为开展羊粪沼液中微生物多样性的研究,须对沼液总DNA进行提取.[方法]研究以总DNA及其PCR产物的琼脂糖电泳结果为判定依据,以SDS结合酚氯仿抽提总DNA的方法为基础,采用逐步增加净化菌泥、溶菌酶裂解以及DNA纯化等优化方法,并测定优化效果.[结果]后续增加的步骤对提高总DNA的提取效率及质量十分有效,所得DNA在得率、大小以及纯净度方面都有所提高,可以满足后续分子实验的要求.[结论]以SDS法为基础,用TENP和PBS洗涤菌泥,添加适量溶菌酶,并适当延长反应时间至3h,再经纯化柱吸附和洗脱的方法可以获得更高质量的羊粪沼液总DNA.