环尾狐猴源弓形虫多位点基因的克隆、测序及基因分型

摘要

为确定引起广东环尾狐猴(Lemur catta)疑似弓形虫病的病原,从2只死亡的环尾狐猴体内无菌采集肺脏、肝脏、心、肾和脑等组织制作常规石蜡切片,HE染色.通过病理组织学观察,鉴定为弓形虫(Toxoplasma sp.)后,采用PCR-DNA测序分析方法对环尾狐猴源分离虫株(TgRTL1)的SAG1、SAG2、SAG3、BTUB、GRA6、L358、PK1、c22-8、c29-2和Apico基因位点进行PCR扩增、克隆和测序,采用DNAStar和MEGA5.05软件,将所获序列与网上下载的弓形虫RH株、ME49株和VEG株相应序列进行比对和同源性分析,并构建系统发育树.结果显示,从广东分离的环尾狐猴源弓形虫株,在10个遗传位点经PCR-DNA测序分析,确定该虫株的基因型为ToxoDB#3.本研究是对中国环尾狐猴源弓形虫采用多位点DNA序列分析进行基因型鉴定的首次报道,为进一步研究我国弓形虫流行病学、生物学特性以及弓形虫病的诊断提供了科学理论依据.