猪发育期牙胚釉原蛋白的分离纯化及其多克隆抗体的制备

摘要

目的制备猪釉质蛋白多克隆抗体,为釉原蛋白的检测提供条件.方法选择1月龄乳猪,分离埋于上下颌骨内的牙胚,刮取牙胚表面干酪样尚未完全矿化的釉质基质,通过盐酸胍抽提及SephadexG-200柱层析分离纯化猪发育期牙胚釉原蛋白,联合免疫家兔,抗血清经DE-52纤维素纯化,并经ELISA测定抗体效价.结果 SDS-PAGE电泳结果发现采用SephadexG-200葡聚糖凝胶过滤能达到较为理想的釉原蛋白分离纯化效果,用所提纯的猪釉原蛋白免疫家兔,成功地制得兔抗猪釉原蛋白抗血清,抗血清稀释达1∶32 000时,采用ELISA法仍有明显的抗原抗体反应.结论本实验成功制备得到抗釉原蛋白多克隆抗体,为釉原蛋白的检测提供了条件.