人肿瘤坏死因子-α基因转染人胚成肌细胞的表达和分泌研究

摘要

目的应用人肿瘤坏死因子-α(hTNF-α)基因转染人胚成肌细胞,观察转染hTNF-α基因后人胚成肌细胞表达和分泌hTNF-α的水平.方法用阳离子脂质体DOSPER介导含hTNF-α基因的穿梭质粒pSV23SHTNF转染人胚成肌细胞;对照组只给予等量的脂质体,不加入质粒.转染基因后24、48、72、96h用免疫组织化学染色观察hTNF-α基因在人胚成肌细胞细胞浆和细胞膜的表达水平,并用ELISA法检测人胚成肌细胞培养上清液中hTNF-α的浓度.结果免疫组织化学染色发现实验组人胚成肌细胞在转染hTNF-α基因后24、48、72、96h均见细胞浆和细胞膜hT-NF-α呈强阳性表达,而对照组均呈弱阳性;ELISA检测发现实验组人胚成肌细胞培养上清液中hTNF-α平均浓度在各时期均高于对照组(P＜0.05),尤以转染72 h后最高,达401.0pg/ml.结论 hTNF-α基因转染成肌细胞,可使成肌细胞持续高表达和高浓度分泌hTNF-α,提示可以用hTNF-α基因转染舌癌周围肌细胞,使癌周微环境肌细胞持续表达和分泌高浓度hTNF-α来抑制舌癌向肌深层浸润.