猪流行性腹泻浙江流行毒株（ZJ-WZ）N基因的克隆及蛋白的原核表达

摘要

为了深入研究猪流行性腹泻病毒（PEDV）N蛋白的免疫学特性、结构与功能，本试验以PEDV标准株CV777为参考毒株设计特异性引物，利用反转录聚合酶链式反应RT—PCRZXPEDV浙江流行毒株（ZI—WZ）中扩增出核衣壳蛋白N基因。将其克隆至克隆载体质粒pBluscriptⅡKs（＋／一）多克隆位点区，经过PCR检测、EcoRI单酶切以及测序鉴定，结果表明成功克隆获得N基因。再将N基因亚克隆到原核表达栽43gpET-30a（＋）中，构建重组表达质粒pET-30a—PEDV—N，并在37qC的条件下经IPTG诱导表达，通过SDS—PAGE分析结果表明，获得了该蛋白的高效表达。免疫印迹反应Westem—blot分析结果表明重组蛋白具有良好的免疫反应性。