反义HSC70与mtP53和肿瘤耐药关系的探讨

摘要

目的观察反义HSC 70 RNA对MCF7/Adr人乳腺癌细胞耐药性影响,探讨其与突变型p53稳定性和肿瘤耐药间的关系.方法利用DNA重组技术将人HSC70 cDNA片段反向克隆至真核表达载体pLXSN中,构建反义人HSC70真核表达质粒pX-AHSC70.用脂质体方法将重组质粒转染至MCF7/Adr人乳腺癌细胞内,以PCR确定转染细胞中外源DNA存在后,Western blot检测HSC70蛋白的抑制程度.MTT法检测细胞耐药性的影响.p53稳定性实验分析反义HSC70 RNA对突变型p53半衰期的改变.结果经G418筛选获得稳定表达反义HSC70 RNA的细胞株MAc70,与空载体MAX细胞相比,HSC70蛋白表达下降42%,细胞耐药性显著下降.p53稳定性实验表明,其胞内突变型p53含量下降,半衰期缩短,稳定性明显下降.结论反义HSC70 RNA能够明显降低HSC70蛋白表达,导致乳腺癌细胞的耐药性下降,提示HSC70可能通过增强突变型p53稳定性的途径而参与MCF7/Adr乳腺癌细胞的耐药.