沉默ACLY基因可抑制结肠癌HCT116细胞的迁移和侵袭

摘要

目的:探讨沉默ATP柠檬酸裂解酶（ATP citrate lyase,ACLY）基因表达对结肠癌HCT116细胞增殖和迁移的抑制作用。方法:采用成簇规律间隔的短回文重复序列（clustered regulatory interspaced short palindromic repeats,CRISPR）/CRISPR相关蛋白9（CRISPR-associated protein 9,Cas9）技术特异性靶向ACLY基因,构建2株稳定沉默ACLY表达的结肠癌HCT116细胞（即ACLY-knockout-1和ACLY-knockout-2,简称KO-1和KO-2）。应用蛋白质印迹法检测KO-1和KO-2组及未敲除ACLY的对照组（Ctrl）HCT116细胞中ACLY蛋白的表达,应用CCK-8法和软琼脂克隆形成实验分别检测Ctrl、KO-1和KO-2组HCT116细胞的增殖能力,划痕愈合实验和Transwell小室法分别检测Ctrl、KO-1和KO-2组HCT116细胞的迁移和侵袭能力,应用实时荧光定量PCR法检测Ctrl、KO-1和KO-2组HCT116细胞中上皮-间质转化标志分子E-cadhrein、N-cadherin和波形蛋白（vimentin,VIM）以及相关转录因子Snail和锌指E盒增强子结合蛋白1（zinc-nger E-box binding homeobox 1,ZEB1）mRNA的表达水平。结果:KO-1和KO-2组HCT116细胞中ACLY蛋白不能正常表达,而Ctrl组HCT116细胞中可见ACLY蛋白表达。细胞培养72和96 h,KO-1和KO-2组HCT116细胞的增殖能力明显低于Ctrl组（P值均＜0.01）;KO-1组HCT116细胞形成的克隆数显著少于Ctrl组（P ＜0.01）。KO-1和KO-2组单克隆HCT116细胞的迁移（P值均＜0.05）和侵袭（P值均＜0.01）能力均低于Ctrl组。KO-1和KO-2组单克隆HCT116细胞中上皮-间质转化标志分子N-cadherin和VIM以及相关转录因子Snail和ZEB1 mRNA的表达水平均明显低于Ctrl组（P值均＜0.01）,E-cadherin mRNA的表达水平均明显高于Ctrl组（P值均＜0.01）。结论:沉默ACLY基因可能逆转结肠癌HCT116细胞的上皮-间质转化,显著抑制结肠癌HCT116细胞的增殖和迁移。