石蒜碱对骨肉瘤的抑制作用及机制探讨

摘要

目的 :分析石蒜碱对人骨肉瘤143B细胞的抑制作用及其潜在分子机制。方法 :分别用0～8μmol/L的石蒜碱处理人骨肉瘤143B细胞,然后采用结晶紫法、MTT法和克隆形成实验检测石蒜碱对143B细胞增殖的影响,细胞划痕愈合实验检测细胞迁移能力,Transwell小室法检测细胞侵袭能力,Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测细胞迁移和侵袭相关标志基质金属蛋白酶7（matrix metalloproteinase-7,MMP-7）和MMP-9,以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase 3和剪切型Caspase 3（cleaved Caspase 3,c-Caspase 3）的表达情况。然后,采用荧光素酶报告基因系统检测细胞中T细胞因子（T-cell factor,TCF）/淋巴样增强因子（lymphoid enhancer factor,LEF）的转录活性,再用蛋白质印迹法检测Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin及下游靶分子Cyclin D1和c-Myc的表达。结果 :石蒜碱明显抑制骨肉瘤143B细胞的增殖、迁移和侵袭,同时促进细胞凋亡（P值均＜0.01）。石蒜碱处理后,143B细胞中迁移和侵袭相关蛋白MMP-7和MMP-9的表达量明显下调（P值均＜0.05）;凋亡相关蛋白Bcl-2表达量下调（P ＜0.01）,而Caspase3和c-Caspase3的表达量明显上调（P值均＜0.05）;同时,TCF/LEF转录活性明显下降（P ＜0.01）,Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin、c-Myc和CyclinD1蛋白水平均明显降低（P值均＜0.05）。结论 :石蒜碱可能通过阻断Wnt/β-catenin信号通路来抑制人骨肉瘤143B细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡。