结核分枝杆菌IS6110和IS1081微滴数字PCR检测体系的建立和应用

摘要

目的建立结核分枝杆菌IS6110和IS1081微滴数字PCR（droplet digital PCR，ddPCR）检测体系，并用于不同类型临床样本的检测。方法常规提取13株结核分枝杆菌和14株非结核分枝杆菌临床分离株DNA，9例结核分枝杆菌阳性肺结核患者和4例其他肺部疾病患者痰DNA，12例结核分枝杆菌阳性肺结核患者和7例健康者血浆DNA。设计合成IS6110和IS1081扩增引物和检测探针，建立ddPCR检测体系。应用该体系检测分枝杆菌、痰和血浆3种DNA样本中靶标拷贝数，进行统计学分析。结果建立了能同时检测IS6110和IS1081的ddPCR体系，该体系检测2个靶标的线性范围分别为0．5～8733和0．2～2893拷贝／μl反应体系。该体系具有较好的重复性（r〉0．95），以非结核分枝杆菌为对照检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异度均为100％。在痰和血浆DNA样本检测中，2个靶标拷贝数在肺结核组均显著高于对照组。结论结核分枝杆菌特异性核酸的ddPCR体系，可用于肺结核患者临床分离株、痰和血浆样本的微量核酸检测，对提高结核病病原学诊断能力有重要意义。