微滴数字PCR定量检测全血样品中结核分枝杆菌特异CFP10基因

摘要

目的 采用微滴数字PCR技术(droplet digital PCR,ddPCR)检测全血中结核分枝杆菌特异性CFP10(10-kDa culture filtrate protein,CFP10)基因的拷贝数含量.方法 收集10例活动性肺结核患者(active tuberculosis,aTB)、10例肺外结核患者(extrapulmonary tuberculosis,EPTB)和5例健康对照者(healthy donars,HDs)全血并提取DNA,优化引物最佳扩增条件并制定重组质粒标准曲线,对样本中CFP10基因的拷贝数含量分别用ddPCR与实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)进行检测和比较.结果 对重组质粒的灵敏度检测显示ddPCR技术明显优于qPCR技术.对样本的检测显示qPCR技术检测aTB、EPTB患者与健康人的全血中CFP10含量之间无统计学意义;但是ddPCR技术检测aTB、EPTB患者与健康人之间有显著统计学意义(P＜0.0001);ddPCR检测aTB和EPTB患者(共20例)CFP10基因绝对定量的浓度约为3.4 ～ 94.0 copies/μL.结论 本研究首次报道采用ddPCR技术能灵敏地用于TB患者全血的诊断.