应用萃取-超滤两步法从过期人血中提纯人血红蛋白

摘要

目的:建立一种有效的实验方法,从过期的全血及血液制品(少浆全血;浓缩红细胞;洗涤红细胞)中,提取人天然无基膜血红蛋白(SFHb).方法:采用甲苯萃取法有效去除血液中的有形成分(细胞膜等),再采用Millipore超滤装置分离提纯人血红蛋白,得到SFHb,然后建立合理的实验方法(电泳、紫外-可见光扫描、反相高效液相、库尔特血液分析系统和ABO血型凝集试验等),确定纯化产品的产率、浓度、纯度.结果:应用上述方法,测得SFHb的浓度为15.2 g/dl;纯度为98.3%;血型凝集实验:阴性;紫外扫描图谱、反相高效液相峰谱与对照品吻合;聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示,产品呈均一分布,90%电泳迁移率近似Marker(45 KD);15%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示确定了血红蛋白蛋白质的亚基组成及分子量,电泳迁移率与对照品完全一致.