LncRNA GAS5靶向miR-103减轻3T3L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用机制

摘要

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)生长抑制特异因子5(GAS5)靶向微小RNA(miR)-103,从而减轻3T3L1脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)的机制。方法培养并诱导分化3T3L1小鼠前脂肪细胞,油红O染色鉴定细胞分化情况。建立3T3L1脂肪细胞IR模型。实验分为对照组、模型组、空载体组(转染pEGFP-C1空载体)、GAS5过表达组(转染pEGFP-C1-GAS5载体)、GAS5过表达+mimic NC组(转染pEGFP-C1-GAS5+mimic NC)、GAS5过表达+miR-103 mimic组(转染pEGFP-C1-GAS5+miR-103 mimic)。实时荧光定量PCR检测细胞中GAS5、miR-103 mRNA水平;液体闪烁法检测葡萄糖摄取能力;蛋白质免疫印迹检测细胞中胰岛素受体底物-1(IRS-1)、p-IRS-1、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT蛋白表达水平;双荧光素酶鉴定miR-103与GAS5的靶向位点。结果诱导后脂肪细胞呈圆形、胞体变大,胞浆丰富,含有大量脂滴,油红染色明显,呈"指环样"结构,模型构建成功。与对照组比较,模型组、空载体组、GAS5过表达+miR-103 mimic组细胞中GAS5mRNA水平、葡萄糖摄取能力、p-IRS-1/IRS-1、PPARγ、GLUT4、p-AKT/AKT蛋白水平降低,细胞中miR-103 mRNA水平升高(P<0.05);与模型组、空载体组比较,GAS5过表达组、GAS5过表达+mimic NC组细胞中GAS5 mRNA水平、葡萄糖摄取能力、p-IRS-1/IRS-1、PPARγ、GLUT4、p-AKT/AKT蛋白水平升高,而miR-103 m RNA水平降低(P<0.05);与GAS5过表达组、GAS5过表达+mimic NC组比较,GAS5过表达+miR-103 mimic组细胞中GAS5 mRNA水平、葡萄糖摄取能力、p-IRS-1/IRS-1、PPARγ、GLUT4、p-AKT/AKT蛋白水平降低,miR-103 mRNA水平升高(P<0.05)。miR-103与GAS5存在互补的结合位点并经双荧光素酶靶向关系验证。结论过表达GAS5后靶向下调miR-103的表达可减轻3T3L1脂肪细胞IR。