基于EphrinBs/EphBs通路探讨桃红四物汤治疗带状疱疹后遗神经痛大鼠模型的作用机制

摘要

目的 观察桃红四物汤对带状疱疹后遗神经痛(PHN)大鼠模型的影响,探讨EphrinBs/EphBs通路在其中的作用机制.方法 60只SD大鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组(采用水痘-带状疱疹病毒慢性感染法构建PHN模型)、阳性组[建模后以普瑞巴林27 mg/(kg·d)灌胃]、治疗组[建模后以桃红四物汤5 g/(kg·d)灌胃],治疗+EphB2-Fc组[建模第3天鞘内注射EphB2-Fc 5μg后以桃红四物汤5 g/(kg·d)灌胃]和治疗+EphrinB2-Fc组[建模第3天鞘内注射EphrinB2-Fc 5μg后以桃红四物汤5 g/(kg·d)灌胃].采用行为学法分别在给药后1 d、7 d和14 d时检测大鼠的机械痛阈值,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠脊髓组织中白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)法检测脊髓神经细胞凋亡,荧光法检测脊髓组织的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测EphrinBs/EphBs通路相关蛋白EphrinB2和EphB2的表达.结果 与空白组比较,建模后大鼠机械痛阈值明显降低,而大鼠脊髓中IL-1β、TNF-α水平、脊髓神经细胞凋亡指数、Caspase-3活性以及EphrinB2、EphB2蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,给予桃红四物汤治疗的大鼠在给药后7 d和14 d时机械痛阈值均明显升高(P<0.05),而大鼠脊髓中IL-1β、TNF-α水平、脊髓神经细胞凋亡指数、Caspase-3活性以及EphrinB2、EphB2蛋白表达水平均明显降低(P<0.05).给予EphBs阻滞剂EphB2-Fc后大鼠脊髓组织中EphB2蛋白表达水平明显低于治疗组(P<0.05).以EphBs激动剂EphrinB2-Fc作用后大鼠脊髓组织中EphrinB2蛋白表达水平明显低于治疗组,而EphB2蛋白表达水平明显高于治疗组(P<0.05).结论 桃红四物汤可能通过抑制EphrinBs/EphBs通路减少炎性因子的释放和脊髓神经细胞凋亡,对PHN大鼠发挥镇痛作用.