bFGF基因体外转染缺血性心肌病大鼠骨髓基质干细胞研究

摘要

目的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)是存在于骨髓等多种组织中的具有形成骨、软骨、脂肪、神经及成肌细胞的多种分化潜能的一类细胞群。该研究将碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)转染入BMSCs对缺血性心肌病(ischemic cardiomyopathy,ICM)的修复作用及机制,为应用bFGF修饰的BMSCs进行移植治疗ICM的动物实验研究提供理论基础。方法采用左前降支结扎法对大鼠进行ICM模型的制备。造模成功后,提取及体外培养大鼠BMSCs,并绘制其生长曲线。首先通过病毒转染的方法将bFGF基因转染入大鼠BMSCs,采用免疫组化法、酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法以及免疫荧光法检测b-FGF基因转染大鼠BMSCs的效果及表达结果,CCK-8法检测大鼠BMSCs增殖活性变化。结果ELISA检测不同时间点转染上清液中分泌的bFGF含量,结果在12~60 h内浓度呈现上升趋势,在60 h可达(19.702±0.074)ng/mL。与对照组比较,转染组分泌的bFGF在72 h内含量增加且均差异有统计学意义(t=122.808,P<0.05)。转染后的部分细胞形态发生变化。免疫荧光法和免疫组化均证实在胞浆中有bFGF颗粒着色阳性,转染成功率可达(72.19±8.83)%,转染效率较高。CCK-8法测大鼠BMSCs细胞增殖活力,结果显示与对照组相比,转染组增殖活性均明显增加,增殖率可高达(124.3±1.2)%(t=23.951,P<0.05)。结论通过病毒转染的方法,成功将具有多重生物学效应的bFGF基因转染入大鼠BMSCs。转染后的大鼠BMSCs可在较长时间内保持较高浓度的bFGF的分泌。bFGF基因转染可促进大鼠BMSCs的增殖和分化。