FoxO1转录因子在巨噬细胞中的表达与炎症的关系

摘要

目的通过研究叉头框蛋白1(forkhead transcription factors of O class 1,FoxO1)转录因子mRNA水平和蛋白水平在巨噬细胞的表达以及检测Foxo1干扰和过表达后巨噬细胞分泌的炎症因子含量,从炎症进展的角度探讨FoxO1转录因子与炎症之间的关系。方法①利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激巨噬细胞Ana-1制作炎症模型,ELISA测炎症因子IL-6、TNF-α的浓度;②采用Real-Time PCR,Western Blot测FoxO1转录因子在mRNA水平以及蛋白水平的含量;③利用脂质体2 000将Fox O1 si RNA转染Ana-1细胞,采用ELISA检测对照组和干扰组分泌的炎症因子IL-6、TNF-α的含量;④利用脂质体2 000将FoxO1过表达质粒转染Ana-1细胞,采用ELISA检测LPS组和过表达组炎症因子IL-6、TNF-α的含量。结果①ELISA实验显示,在LPS的浓度为50 ng/mL时巨噬细胞分泌的炎症因子IL-6、TNF-α含量分别为2 190、1 124 ng/mL,干预时间为36 h时分别为2 190、1 995 ng/mL。此条件下炎症因子含量最高;②Real-Time PCR实验和Western blot实验结果显示,在LPS组FoxO1转录因子mRNA水平是对照组的0.36倍,蛋白水平的表达量是对照组的0.58倍;③Foxo1 siRNA干扰实验结果显示,与对照组相比,干扰组巨噬细胞分泌炎症因子TNF-α含量从782 ng/mL上升到1 290 ng/mL,IL-6的含量从161 ng/mL上升到251 ng/mL;4.脂质体转染过表达FoxO1质粒实验显示,与LPS组相比,过表达组巨噬细胞分泌炎症因子TNF-α的含量从1 785 ng/mL下降到1 329 ng/mL,IL-6含量从486 ng/mL下降到317 ng/mL。结论LPS刺激巨噬细胞Ana-1产生炎症反应,导致炎症因子的释放,同时下调Foxo1转录因子在mRNA水平和蛋白水平的含量,特异性FoxO1基因沉默可上调炎症因子的释放。过表达FoxO1可以使炎症反应减轻,证明Foxo1转录因子参与巨噬细胞引起的炎症反应。