T-载体在聚合酶链反应扩增产物克隆中的应用

摘要

目的探讨克隆聚合酶链反应(PCR)扩增产物的简便方法.方法用PCR方法分别特异性扩增Wilms瘤基因wt1和尿激酶受体(UPAR)基因,并利用Taq聚合酶具有的延伸酶活性将扩增产物直接克隆入T-载体,EcoRⅠ酶切鉴定阳性重组子.结果设计的引物可分别扩增wt1基因锌指区(343bp)和UPAR基因编码区全长(1083bp);未经修饰的常规PCR和高保真PCR扩增产物可被直接克隆入pGEM-T Easy载体,其中正确重组率为62.5%～87.5%;克隆的wt1基因和UPAR基因已被成功用于竞争性PCR或表达.结论 T-载体法是克隆PCR产物通用而有效的方法.