罗丹明染料荧光猝灭法测定超痕量辣根过氧化物酶

摘要

在HAC-NaAC缓冲液中,辣根过氧化物酶催化H2O2氧化KI生成I2,过量的I-可与I2结合形成I-3,而I-3分别与罗丹明S(RhS),罗丹明G(Rh6G),罗丹明B(RhB)和丁基罗丹明B(b-RhB)反应导致四体系在580,580,554和554 nlTl处的荧光强度降低.在选择条件下,对于RhS,Rh6G,RhB,b-RhB四体系,辣根过氧化物酶的浓度分别在8～6 400,40～4 000,32～3 200,40～6 400 pg·mL-1范围内与其荧光猝灭强度成线性关系,其检出限分别为3.2,3.0,2.4,3.7 pg·mL-1.其中RhS催化体系较好,用于酶联免疫乙肝试剂盒中辣根过氧化物酶活力的测定,结果比较满意.