冠突曲霉Ac-nsdD基因鉴定分析及抗盐胁迫功能分析

摘要

【目的】进一步探讨GATA转录因子Ac-nsdD在茯砖茶的冠突曲霉中的调控作用。【方法】根据基因组注释结果及构建系统进化对冠突曲霉Ac-NsdD蛋白序列分析。运用同源重组和根癌农杆菌介导的方法构建Ac-nsdD基因敲除的突变体,对突变体进行表型分析。【结果】根据基因组注释结果分析冠突曲霉Ac-nsdD编码一个假定的具有保守DNA结合结构域ZnF GATA的转录因子。系统进化分析表明,Ac-nsdD与其它真菌同源的NsdD有较为紧密的亲缘关系。进一步运用同源重组的方法,获得一个该基因敲除的突变体。与野生型菌株比较,突变体在M3Y培养基培养,表现为产闭囊壳量明显减少;然而在5%NaCl M3Y培养基培养,突变体表现产闭囊壳量变少,产分生孢子量显著变多,中间培养物黑色色素形成显著增加,生长速度变小;在17%NaCl M3Y培养基培养,突变体表现闭囊壳数目几乎为零,分生孢子量变少,生长速度变小。【结论】Ac-nsdD基因在无盐环境下可能激活有性发育。该基因在应答低渗透压盐胁迫条件下,可能激活有性发育和抑制无性发育,平衡有性和无性发育,且参与色素的生物合成;在应答高渗透压盐胁迫条件下,可能激活有性发育、无性发育和营养生长。本试验为进一步研究与Ac-nsdD基因相偶联的一些信号通路及其下游基因,为丝状真菌的有性及无性发育的一些共有的和独特的信号转导途径提供实验室数据。