RNA干扰南美白对虾白斑病毒VP28基因的体外研究

摘要

为方便筛选VP28特异性siRNAs,通过构建真核表达载体pEGFP-VP28,然后将设计的siRNA与pEGFP-VP28共转染BHK细胞,并采用Western blotting检测GFP-VP28融合蛋白的表达情况以及半定量RT-PCR检验siRNA抑制VP28转录的效果,建立了体外RNA干扰法筛选系统.结果表明,pEGFP-VP28能在BHK细胞正常表达,设计的3对siRNA对VP28 的mRNA转录均有不同程度的干扰效果,其中siRNA2的干扰效果最为显著.研究结论为开展RNA干扰在对虾体内抑制 WSSV的研究建立基础.