生菜质体表达载体构建及gfp基因原核表达分析

摘要

以四季耐抽薹生菜为材料,PCR扩增并克隆了生菜质体rpoA基因的两侧翼的基因片段,利用该两基因区段作为定点整合外源基因的同源重组片段,构建了生菜质体定点转化载体pBrpoA-GFP,并进行了原核表达分析.结果表明,PCR所扩增的两条基因区段大小为1.2与1.1 kb.进行序列分析后,经酶切、连接和转化,构建成含Prrn-gfp-aadA-TpsbA表达金的质体表达载体,酶切鉴定表明,所构建载体符合预期设计;gfp基因能够在质体特异性启动子Prrn及终止子TpsbA的调控下高效表达,表达量约占总可溶性蛋白的45.6％,包涵体占菌体蛋白的47.5％,该载体的构建为后期生菜质体转化体系的建立和其它功能基因导入生菜质体进行性状改良奠定了基础.