土壤木霉菌实时荧光定量PCR检测体系的建立及应用

摘要

基于木霉菌属真菌内转录间隔区(ITS)序列,设计特异性引物DG和DT应用于土壤木霉菌属基因组DNA的实时荧光定量检测,并建立相应的实时荧光定量PCR体系.应用该反应体系对黑土区长期无施肥(NF)、长期施用N、P化肥(NP)以及长期配施N、P化肥和有机肥(NPM)3种方式下大豆田土壤木霉菌基因组DNA进行绝对定量检测.结果表明,引物DG和DT对木霉菌属真菌有较好的特异性；实时荧光定量PCR反应标准曲线相关系数R2=0.993,斜率为-0.282 9,而熔点曲线无杂峰；在大豆生育时期的苗期,NF、NP及NPM措施下每克干土中木霉菌基因组DNA含量分别为0.4 ng、0.8 ng和1.2 ng,且NPM措施含量显著高于NF及NP措施(P＜0.05).图4,参17.