结合胰岛素受体的胰岛素位点研究

摘要

目的用肽库筛选技术寻找与胰岛素受体结合的胰岛素位点.方法用噬茵体随机环七肽库,与亲和于脂质体表面的鼠肝胰岛素受体亲和筛选,测定阳性噬茵体与胰岛素受体的亲和力,测定高亲和力克隆插入DNA序列,推断出融合于gⅢ蛋白末端环七肽的氨基酸残基序列.固相法选择性人工合成多肽配基YS,测定多肽YS与胰岛素受体的亲和力.比较高亲和力短肽与胰岛素的结构特征,寻找胰岛素肽链的类似结构,推断与胰岛素受体结合的胰岛素位点.结果经过三轮亲和筛选,选择12个阳性克隆测序,三种短肽YS(CYIRSLRLC)、RL(CRPLLRDRC)、MN(CNFLYGILC)出现频率高,都含有较多Leu和Arg.合成肽YS与胰岛素受体有较高亲和力,Kd值为4.31×108L/M.结论研究提示,胰岛素B链B11(Leu)、B15(Leu)是与胰岛素受体的直接结合位点.