棉蚜细胞色素P450 CYP6J1的克隆与表达

摘要

为了深入了解细胞色素P450 CYP6J1蛋白的结构和功能,本实验克隆获得了棉蚜Aphis gossypii P450CYP6J1基因,对该基因进行信息学及原核表达分析,通过SDS-PAGE检测目的蛋白的表达结果,并用Westem-blot进行验证.结果表明,P450 CYP6J1序列长1 398 bp,编码氨基酸数为465,理论分子量为53.67 kD,理论等电点为8.80.氨基酸序列分析表明该序列具有完整的开放阅读框,且没有信号肽.同源性分析表明,棉蚜cDNA序列推导的氨基酸与豌豆蚜Acyrthosiphon pisum的保守性最为接近,一致性可达92％.在大肠杆菌Escherichia coli BL21中表达获得的His-CYP6J1蛋白,并用Western-blot检测目的蛋白大小正确.这些研究结果为棉蚜P450 CYP6J1多克隆抗体制备提供了基础.