新型自杀基因酿酒酵母菌胞嘧啶脱氨酶基因修饰供者T淋巴细胞防治移植物抗宿主病体外研究

摘要

目的 将新型自杀基因--酿酒酵母菌胞嘧啶脱氨酶基因(YCD)导入人T淋巴细胞,在体外证明YCD自杀基因体系的有效性,为自杀基因应用于体内防治移植物抗宿主病(GVHD)提供了理论基础.方法 利用脂质体法转染包装细胞293T,分离、培养人外周血单个核细胞,病毒上清转染活化后的人T细胞,应用Puromycin筛选扩增,利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测目的 基因的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测细胞因子的分泌情况,噻唑蓝(MTT)法检测其对前体药物的敏感性.结果 通过高速离心富集RV、CH-296包被+离心感染法等,对经高效扩增的人T淋巴细胞基因感染率可达38.2%.RT-PCR可检测到转基因T-YCD细胞中YCD基因的表达,筛选出的转基因T淋巴细胞的细胞因子分泌无显著变化.体外实验证实转基因T淋巴细胞可被前体药物5氟胞嘧啶(5-FC)显著杀伤.结论 利用pMSCV-YCD-Puro载体,可将YCD基因高效导入人T淋巴细胞,快速筛选出阳性细胞;转基因T淋巴细胞的细胞因子分泌功能未受显著影响,在体外证实导入YCD的转基因T淋巴细胞可被5-FC有效杀伤.