miR-32-5p和FKBP14基因转染对SPC-A1细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其靶向关系验证

摘要

目的 观察miR-32-5p和FK506结合蛋白14(FKBP14)基因转染对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系SPC-A1增殖、迁移、侵袭能力的影响,并验证两者之间靶向关系.方法 选取SPC-A1细胞,将细胞为A、B、C、D、E、F组,分别转染miR-32-5p+ pcDNA-FKBP14、miR-32-5p+ pcDNA、miR-32-5p、miR-con、pcDNA-FKBP14、pcDNA-con,采用MTF法检测细胞吸光度值,并计算细胞存活率;Transwell实验检测细胞迁移数、侵袭数,Western blotting法检测细胞CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达量.取SPC-A1细胞,将细胞分为G、H、I、J组,分别转染FKBP14-WT+ miR-con、FKBP14-WT+ miR-32-5p、FKBP14-MUT+ miR-con、FKBP14-MUT+ miR-32-5p,采用荧光素酶活性检测试剂盒检测细胞荧光素酶活性.取SPC-A1细胞,将细胞分为K、L、M、N组,分别转染miR-32-5p、miR-con、anti-miR-32-5p、anti-miR-con,Western blotting法检测细胞中KBP14蛋白相对表达量.结果 与B组比较,A组细胞存活率、迁移细胞数、侵袭细胞数及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达量增加(P均＜0.05);与D组比较,C组细胞存活率、迁移细胞数、侵袭细胞数及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达量减少(P均＜0.05);与F组比较,E组SPC-A1细胞存活率、迁移细胞数、侵袭细胞数及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达量增加(P均＜0.05).与G组比较,H组细胞荧光素酶活性减弱(P＜0.05);与I组比较,J组细胞荧光素酶活性无显著变化(P＞0.05).与L组比较,K组FKBP14蛋白相对表达量减少(P＜0.05);与N组比较,M组FKBP14蛋白相对表达量增加(P＜0.05).结论 过表达miR-32-5p或敲减FKBP14后SPC-A1细胞存活率降低,迁移细胞数、侵袭细胞数减少,miR-32-5p与FKBP14存在靶向调控关系.