锌原卟啉-9腹腔注射对脑出血大鼠神经功能的改善作用及其机制

摘要

目的 探讨锌原卟啉-9(ZPP-Ⅸ)腹腔注射对脑出血(ICH)大鼠神经功能的影响,并探讨其可能机制.方法 95只SD大鼠随机分为4组,ZPP-Ⅸ组(30只)、ICH组(30只)、DMSO组(30只)大鼠于脑立体定位仪上缓慢注射自体股动脉血50μL至基底节区,以制备ICH模型;正常组(5只)大鼠于相同部位打孔进针,不注血.ZPP-Ⅸ组在制模后30 min内腹腔注射10mg/kg ZPP-Ⅸ,DMSO组给予10 mg/kg的35％ DMSO,正常组、ICH组均给予等量生理盐水.采用Gareia18分测评法评价大鼠神经功能,Western blotting法检测脑组织Nrf2、结合型Nrf2(binding-Nrf2)、HO-1、NF-κB、TNF-α蛋白,RT-PCR法检测脑组织Nrf2、HO-1、NF-κB、TNF-α mRNA,免疫荧光双标法检测脑组织HO-1、Nrf2、NF-κB、TNF-α与CD11b(小胶质细胞标记物)共染的阳性细胞数.结果 与正常组比较,ICH组、ZPP-Ⅸ组、DMSO组制模后6h、12 h、24 h、48 h、72 h、7d神经功能评分减少(P均＜0.05);与ICH组比较,ZPP-Ⅸ组12h、24hA8 h、72 h、7d的神经功能评分减少(P均＜0.05).与正常组比较,ICH组、DMSO组、ZPP-Ⅸ组各时间点HO-1、Nrf2、NF-κB、TNF-α蛋白表达增加,binding-Nrf2蛋白水平减少(P均＜0.05);与ICH组比较,ZPP-Ⅸ组12 h、24h、48 h、72h、7 d HO-1蛋白表达减少,binding-Nrf2、NF-κB、TNF-α表达增加(P均＜0.05).与正常组比较,ICH组和DMSO组HO-1、Nrf2 mRNA表达在制模后各时间点均增加,NF-κB、TNF-α mRNA表达于制模24h、48h、72 h、7d增加(P均＜0.05);与ICH组比较,ZPP-Ⅸ组24h、48 h、72 h、7d的HO-1、Nrf2 mRNA表达减少,NF-κB、TNF-α mRNA表达在制模后各时间点均增加(P均＜0.05).与ZPP-Ⅸ组比较,ICH组制模6h、12 h、24h、48h、72h、7d的HO-1与CD11b共表达阳性细胞增加,ICH组制模12 h、24h、48h、72 h、7 d Nrf2与CD11b共表达阳性细胞增加(P均＜0.05).结论 ZPP-Ⅸ可能是通过抑制HO-1的表达,从而抑制Nrf2的解离、入核及增加下游炎症因子NF-κB、TNF-α的表达,来加剧ICH大鼠神经功能损伤的作用.