真核表达载体质粒pcDNA4/rhHIF-1α的构建与鉴定

摘要

目的 构建重组人缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)真核表达载体质粒pcDNA4/rhHIF-1α,为进行人HIF-1α基因的克隆与表达及其抗体的制备研究奠定基础.方法 从人血细胞中提取总RNA,RT-PCR法反转录合成cDNA.设计两对引物分别调取目的 基因片段A和B,与T载体连接后转化大肠杆菌JM109,LB平板筛选菌落,提取质粒.测序正确后双酶切先后克隆进入pcDNA4/HisMaxA载体.结果 获得重组质粒pcDNA4/rhHIF-1α,经PCR扩增获得的目的基因相对分子质量与预计相同,插入pcDNA4/HisMaxA载体部位正确.结论 重组的人HIF-1α真核表达载体质粒pcDNA4/rhHIF-1α构建成功,所选用的pcDNA4/HisMax可高表达目的基因,可用于人HIF-1α基因的克隆与表达及其抗体制备的研究.