解偶联蛋白-2基因过表达慢病毒载体的构建

摘要

目的 构建解偶联蛋白-2(UCP-2)基因慢病毒表达载体.方法 用RT-PCR技术从转基因肥胖小鼠肝脏组织中获得UCP-2基因编码区片段,用In-Fusio技术将PCR产物连接入Age I单酶切后的慢病毒转移质粒体pGC-FU,进行鉴定及序列测定.将构建成功的转移质粒和两种辅助包装原件载体质粒pHelper1.0、Helper2.0(VSVG元件)共转染293T细胞,包装成慢病毒,浓缩纯化后检测滴度.结果 RT-PCR产物经电泳证实成功获取UCP-2基因cDNA 克隆,鉴定证实慢病毒转移质粒连接构建正确,病毒包装滴度为2×108 TU/ml.结论 成功构建了UCP-2基因慢病毒表达载体.