Npu DnaE内含肽构建及其对293T细胞高效反式剪接活性分析

摘要

目的 构建Npu DnaE内含肽,探讨Npu DnaE内含肽是否在293T细胞中具备高效反式剪接活性.方法 制备融合基因Vn-NDn-myc和NDc-Vc,插入pCDH-CMV-MCS-EFl-Puro载体,构建质粒.转染293T细胞,荧光显微镜下观察目的蛋白Venus是否形成.48 h后收集细胞蛋白,应用Western blot技术进一步印证.结果 构建的质粒经限制性内切酶鉴定及测序比对正确,转染293T后可见共转染细胞组出现明亮荧光,弥漫分布于细胞质中,Western blot证明高量目的蛋白Venus形成.结论 成功构建Npu DnaE内含肽,其能在293T细胞中发挥反式剪接的生物学功能,并具有高效的剪接效率及功能目的蛋白形成率.