萝卜基因组DNA RAPD与ISSR-PCR反应体系优化

摘要

对影响PCR反应的主要因子--模板DNA、引物、dNTPs和Mg2+浓度进行优化,建立起适合于萝卜基因组DNA的RAPD和ISSR反应体系.RAPD反应体系(18μl)为随机引物0.4～0.6 μmol/L,dNTPs 0.15～0.2 mmol/L,Mg2+2.0mmol/L,模板DNA 10～40 ng,TaqDNA聚合酶0.8 U;ISSR反应体系(16μl)为引物0.5μmol/L,dNTPs 0.16 mmol/L,Mg2+2.5 mml/L,模板DNA 10～40 ng,TaqDNA聚合酶0.64 U.对扩增程序中复性温度进行了梯度PCR试验,表明35～42℃(37℃)与52.4～58.3℃(55℃)分别适于萝卜基因组DNA的RAPD-PCR和ISSR-PCR反应;应用优化的RAPD和ISSR反应体系对17个萝卜品种进行了鉴定分析.研究结果将为萝卜分子育种、品种鉴定与种子纯度检测提供重要的技术基础.