通过同源重组构建酿酒酵母新型表达质粒

摘要

利用同源重组的方法,构建了具有高拷贝数和高稳定性的新型酿酒酵母表达质粒.对酵母附加体型载体pHC11进行一系列改造,得到质粒pHC11R,并用适当的酶切线性化;利用PCR 反应得到人IFNα2b表达单元片段,它的两端和线性化的pHC11R的两端具有50 bp左右的同源区段.上述两个片段共转化酿酒酵母,在酵母体内经同源重组后得到表达质粒pHC11R-IFNα2b, 该表达质粒与pHC11-IFNα2b相比去除了质粒上用于在大肠杆菌中复制和筛选所需的序列,在宿主菌中的稳定性和拷贝数均有明显提高,同时外源基因的表达量也获得了一定程度的提高.在此基础上,进一步构建了带有不同表达元件的pHR系列载体,使得外源基因能够通过同源重组在酿酒酵母中快速、方便地克隆和表达.