水牛腔前卵泡体外培养效果影响因素的研究

摘要

[目的]主要探讨水牛腔前卵泡体外培养的影响因素.[方法]采用梳刮法从沼泽型水牛的卵巢中回收得到腔前卵泡,而后用McCoy's5a培养液在96孔培养板中体外培养5～10 d,在显微镜下观测腔前卵泡的形态与增长情况,并用台盼蓝染色鉴定腔前卵泡的存活情况.[结果]在培养液中添加100 μg·L-1的FSH能显著提高腔前卵泡培养5和10 d后的增长幅度,当同时添加50 mg·L-1的维生素C时增长幅度进一步加强;添加50 mg·L-1的维生素C能提高腔前卵泡培养10 d后的形态正常率,但对卵泡增长及存活没有影响;添加50 μg·L-1的EGF能提高腔前卵泡培养5 d的增长幅度,但对培养10 d后腔前卵泡的作用不显著.随着卵泡的直径增加,体外存活率升高,增长的幅度上升,异常率下降.60～100 μm的腔前卵泡用三维培养法(琼脂糖包埋)体外培养10 d的直径增长幅度显著高于二维培养法(琼脂糖铺底)和普通培养法,且形态异常显著低于二维培养法和普通培养法;100～140 μm卵泡用二维培养法培养的增长幅度最大,培养成活率最高.[结论]FSH能促进水牛卵泡的体外增长,维生素C能维持卵泡的正常形态结构,且两者的协同作用显著;水牛卵泡体外发育能力随其体积的增大而增强;三维培养法适宜于培养60～100 μm的卵泡,而二维培养法有利于100～140 μm卵泡的体外发育.