利用cDNA-SRAP分析赤霉素诱导甘蔗节间伸长的差异表达

摘要

[目的]探寻赤霉素诱导甘蔗节问伸长基因表达差异的分子基础,为分离节间伸长相关基因奠定基础.[方法]以新台糖22号为材料,在伸长初期以浓度为200 mg·L-1的赤霉素进行叶面喷施,以喷施清水为对照,分别提取总RNA进行等量混合,获得2种不同处理的样品池,采用cDNA-SRAP技术进行基因差异表达分析.[结果]700对引物组合共扩增到约15 000条、大小在50-750 bp的cDNA片段.在GA3处理组和对照组中,甘蔗幼茎中的转录水平具有很大的差异,获得134条差异条带.从反向Northern杂交结果阳性的S-TDFs中选取24个片段进行克隆和序列分析,按照功能可以将24个差异表达基因片段S-TDFs(cDNA-SRAP transcript derived fragments)分为6类,分别为能量与代谢相关基因(4条,占总数的16.67%)、未知功能蛋白基因(6条,占总数的25%)、未知基因(10条,占总数的41.66%)、细胞壁生物合成与修饰相关基因(1条,占总数的4.17%)、信号传导相关基因(2条,占总数的8.33%)和转录因子相关基因(1条,占总数的4.17%).[结论]cDNA-SRAP完全适用于差异表达分析,从中获得一些与甘蔗节间伸长相关的差异基因片段,这些基因可用于甘蔗节问伸长的分子机理研究.