日本血吸虫sj CyclophilinA基因的克隆、表达及其生物学功能研究

摘要

[目的]克隆和表达了日本血吸虫CyclophilinA(Sj CyPA)编码基因cDNA,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果.[方法]从实验室构建的7天童虫消减cDNA文库中,PCR扩增-EST序列的基因全长cDNA,提交到NCB1,登录号为GQ403666.应用荧光实时定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,以pET28a(+)为载体构建重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达.诱导、表达、纯化和复性重组蛋白,测定其PPIase活性.利用Western blot检测重组蛋白的抗原性.以重组抗原免疫小鼠,评估其对小鼠诱导的免疫保护效果.[结果]PCR获得了SjCyPA编码基因的全长cDNA,其开放阅读框为519 bp.荧光实时定量PCR分析表明,该基因在13 d童虫表达量最高,为童虫期高表达基因.构建了重组表达质粒pET28a(+)-sj CyPA,并在大肠杆菌中成功表达.复性重组蛋白具有PPIase活性.Western blot试验显示该重组蛋白具有良好的抗原性,在小鼠免疫试验中,与空白对照组比较,免疫组小鼠获得18.72%的减虫率和44.6%的肝脏减卵率.[结论]获得了日本血吸虫童虫期高表达的SjCyPA基因的全长cDNA,成功构建了Sj CyPA原核重组表达质粒,在大肠杆菌中成功表达,纯化复性得到有PPlase活性的SjCyPA重组蛋白,并证实该重组抗原在小鼠体内诱导产生了部分免疫保护效果.