定量薄层层析法用于内切β-1,3-葡聚糖酶筛选纯化过程中酶活力测定

摘要

根据寡糖与显色剂反应后的呈色物质在540nm处吸光值强度,建立了一种用于分析水解液中寡糖浓度的定量薄层层析法.应用阴离子交换层析结合两步分子筛层析技术在β-葡聚糖酶样品(来源于Trichoderma reesei)中纯化得到一种内切β-葡聚糖酶(EndoG,23.6ku),内切酶纯化44.5倍,酶活回收率12.4％.底物特异性及水解产物分析表明该酶属于内切β-1,3-葡聚糖酶,初步分类为EC3.2.1.39.经测定,EndoG降解热凝胶主要生成昆布二糖和昆布三糖.最适反应条件为pH5.0,50℃.由于EndoG对水不溶性底物热凝胶具有较高的水解活性,对该酶的深入研究可以为提高热凝胶利用率和应用范围提供帮助.