利用猪单个胚胎建立高效快速的CRISPR/Cas9打靶位点检测方法

摘要

基因工程猪可作为动物模型研究人类疾病,也是异种器官移植最合适的供体.CRISPR/Cas9系统是高效特异的基因编辑工具.因此本文通过显微注射的方式将sg RNA和Cas9 m RNA注射入单细胞期的孤雌胚胎中,待其发育为囊胚后检测打靶效率.T7EN1酶切和TA克隆测序结果表明,本研究可以在猪的孤雌胚胎中同时实现3个基因（B2M,CIITA,GGTA1或者LDLR,LEP,LEPR）的高效敲除（敲除率分别为62.5%和50%）,为使用CRISPR/Cas9系统高效、快速和经济地建立多基因修饰的猪模型提供了基础.