4种阪崎肠杆菌检测质粒DNA标准物质的研制

摘要

实时荧光定量(PCR)方法已成为阪崎肠杆菌的可靠检测方法.为了保证该方法检测结果的准确性、可靠性和可比性,研制了4种质粒DNA标准物质,其分别含有一种阪崎肠杆菌PCR检测靶基因(MMS,ITS,16S rDNA,ompA).采用紫外分光光度法(UV)和高分辨电感耦合等离子体质谱法(HR-ICP-MS)对标准物质进行定值,对该标准物质的均匀性、稳定性进行了评估,并对定值不确定度进行了评定.结果显示,4种质粒DNA标准物质量值可靠,均匀性和稳定性良好,可以在-20℃下保存1 a以上.4种质粒DNA标准物质的最终定值结果为(52.3±1.8)、(62.4±2.1)、(75.1±2.1)和(85.7±2.6)ng/μL(k=2).对质粒DNA标准物质与阪崎肠杆菌基因组DNA的可替代性进行了研究,证明研制的质粒DNA标准物质可以替代阪崎肠杆菌基因组DNA对阪崎肠杆菌进行检测,满足阪崎肠杆菌检测实验室质量控制和方法验证的需求.